簡要描述:牛生長激素是牛腦垂體分泌的一種肽類激素,用于調(diào)節(jié)代謝過程、促進(jìn)動(dòng)物生長。研究發(fā)現(xiàn)將牛生長激素注入母牛體內(nèi)可以增加其產(chǎn)奶量。牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)牛生長激素基因的試劑盒
詳細(xì)介紹
品牌 | YLKBIO | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
貨號(hào) | YLK10312P | 規(guī)格 | 50T |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) | 英文名稱 | Bovine?growth?hormone?(BGH)Probe?qPCR?Kit |
運(yùn)輸方式 | 低溫運(yùn)輸 | 保存條件 | -20℃保存 |
有效期 | 12個(gè)月 | 自備試劑 | 樣品DNA |
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 | 牛生長激素基因染料法熒光定量PCR試劑盒 |
產(chǎn)品簡介
通用名稱:牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒
Name:Bovine growth hormone (BGH)Probe qPCR Kit
包裝規(guī)格:50T/盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
牛生長激素是牛腦垂體分泌的一種肽類激素,用于調(diào)節(jié)代謝過程、促進(jìn)動(dòng)物生長。研究發(fā)現(xiàn)將牛生長激素注入母牛體內(nèi)可以增加其產(chǎn)奶量。牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)牛生長激素基因的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3.提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)牛生長激素基因DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.既可用于定性檢測(cè),又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
7.本產(chǎn)品只能用于科研。
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為12個(gè)月。
自備試劑
樣品DNA
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品待提取,最好設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的是PC(樣品制備陽性對(duì)照)和NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢匀£栃詫?duì)照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致,以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA/提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),1個(gè)用于PCR陽性對(duì)照(用第4號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):
成分/每管 | 樣品管 N+2個(gè) | PCR陰性對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(1-6管) |
A | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
D | 3 μL | 3 μL | 3 μL |
N+2個(gè)待測(cè)DNA模板 | 7 μL | - | - |
C | - | 7 μL | - |
第6步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(1-6號(hào)) | - | - | 7 μL(1號(hào)樣到1號(hào)管,2號(hào)樣到2號(hào)管…) |
11.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR:
過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
PCR反應(yīng) (45個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 60 sec(采集FAM通道的熒光信號(hào)) |
四、數(shù)據(jù)處理
12.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽性對(duì)照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品核酸濃度的log值,再推算出其濃度。
13.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽性或陰性,則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于39。對(duì)待測(cè)樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于39則為陽性。如果在39-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。
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