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牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒

簡要描述:牛生長激素是牛腦垂體分泌的一種肽類激素,用于調(diào)節(jié)代謝過程、促進(jìn)動(dòng)物生長。研究發(fā)現(xiàn)將牛生長激素注入母牛體內(nèi)可以增加其產(chǎn)奶量。牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)牛生長激素基因的試劑盒

  • 更新時(shí)間:2024-06-27
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 生產(chǎn)地址:上海
  • 訪  問  量:3279

詳細(xì)介紹

品牌YLKBIO純度詳詢
貨號(hào)YLK10312P規(guī)格50T
供貨周期現(xiàn)貨主要用途科研實(shí)驗(yàn)
應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè)英文名稱Bovine?growth?hormone?(BGH)Probe?qPCR?Kit
運(yùn)輸方式低溫運(yùn)輸保存條件-20℃保存
有效期12個(gè)月自備試劑樣品DNA
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品牛生長激素基因染料法熒光定量PCR試劑盒

產(chǎn)品簡介

通用名稱:牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒

Name:Bovine growth hormone (BGH)Probe qPCR Kit

包裝規(guī)格:50T/盒


產(chǎn)品及特點(diǎn)

牛生長激素是牛腦垂體分泌的一種肽類激素,用于調(diào)節(jié)代謝過程、促進(jìn)動(dòng)物生長。研究發(fā)現(xiàn)將牛生長激素注入母牛體內(nèi)可以增加其產(chǎn)奶量。牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒就是以探針法熒光定量PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)牛生長激素基因的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):

1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。

2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3.提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高,引物是根據(jù)牛生長激素基因DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.既可用于定性檢測(cè),又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。

6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。

7.本產(chǎn)品只能用于科研。

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為12個(gè)月。

自備試劑

樣品DNA

使用方法

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對(duì)照。

1.       標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2,1。

2.      用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同。

3.      在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.      換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.      換槍頭,在4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.      重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

7.      如果有N個(gè)樣品待提取,最好設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的是PC(樣品制備陽性對(duì)照)和NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢匀£栃詫?duì)照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致,以此作為PC。另外用水作為NC。

8.      用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA/提取試劑盒兼容。

三、Probe qPCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9.如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),1個(gè)用于PCR陽性對(duì)照(用第4號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):

成分/每管

樣品管

N+2個(gè)

PCR陰性對(duì)照管

標(biāo)準(zhǔn)曲線

樣品管(1-6管)

A

10 μL

10 μL

10 μL

D

3 μL

3 μL

3 μL

N+2個(gè)待測(cè)DNA模板

7 μL

-

-

C

-

7 μL

-

6步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(1-6號(hào))

-

-

7 μL1號(hào)樣到1號(hào)管,2號(hào)樣到2號(hào)管









11.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行PCR:

過程

溫度

時(shí)間

預(yù)變性

95℃

10 min

PCR反應(yīng)

45個(gè)循環(huán))

95℃

15 sec

60

60 sec(采集FAM通道的熒光信號(hào))






四、數(shù)據(jù)處理

12.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽性對(duì)照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品核酸濃度的log值,再推算出其濃度。

13.如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽性或陰性,則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于39。對(duì)待測(cè)樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于39則為陽性。如果在39-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。

 

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